在反相液相色谱分析中，当被分析物在反相条件下可离解时，就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的酸碱解离常数pka在1－11之间，选择正确的缓冲液pH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的pH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。

在选择缓冲液pH值之前，应先了解被分析物的酸碱解离常数pka，高于或低于pka两个pH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从pH公式：

pH＝pka+log（[A-]/[A]）（[A-]为已电离浓度/[A]未电离时的浓度）

得知，溶液pH值高于或低于pka两个单位，化合物中99％以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。

让我们通过一个离子来看如何选择pH值

例如苯甲酸，苯甲酸的pka等于4.2，理论上讲当pH值等于2.2时，99％的苯甲酸以中性化合物存在，pH值等于6.2时，99%的苯甲酸以离子形式存在，所以当缓冲液pH值等于2.2时，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱，从表1 可知，磷酸和柠檬酸缓冲液能用于pH等于2.2。

如果选择不到合适的，样品的pKa与流动相的pH非常接近，那么流动相pH微小的变化，都会引起样品保留时间较大的变动。

      当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在pH值小于9时都被质子化，所以所有pH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许会问水的pH值大约是7，为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，pH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，从表1 可知，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为pH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。

      在上面两个例子中，pH＝3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，在一般情况下，它是含羧基和氨基化合物分析中缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。其次，也要考虑检测波长的要求，磷酸可以让用户选择更低的吸收波长，而醋酸（醋酸氨）则能做到质谱友好。